性消减杂交的技术是抵御PCR与消减杂交技术相结合的,越简单、越快速的分离差异基因的方法。有研究人员利用该方法建立了鹅肥肝差异表达基因的文库,同时结合污点印迹杂交筛选差异基因克隆并进行测序分析,获得116个差异表达基因。填肥后的朗德鹅肝中,高表达基因占多数,对这些基因进行分子功能分类后发现,这些基因大部分参与脂肪物化合成、运转、信号转导等生化过程。选择16个与代谢相关且在肥肝中特异表达的基因进行荧光定量PCR验证。验证结果发现大部分基因与SSH结果一致,其中有4个基因可能出现假阳性,但是在目前鹅的基因组序列未全测定以及DDRT-PCR假阳性率较高的情况下,要筛选出与肥肝形成相关的基因表达谱,SSH方法可能是理想的。研究还筛选出18个未知功能的基因,初步分析这些新的EST可能来源于新的基因,可能是新的调节肥肝形成的基因,展现出SSH对寻找差异表达新基因所具有的优势。
朗德鹅肝脏脂肪代谢是研究肥肝形成机制的一条有效途径。形成鹅肥肝的机制主要在于新合成的脂类在胞体质内的储存,与作为血浆脂蛋白进行分泌的平衡被转变而造成。肝脏的脂分泌能力不能抵消胞体质内新合成脂的储存间,因而导致脂肪在肝脏中沉积。脂肪形成是能量储存的重要脂肪酸的合成是由酰基辅酶A艘化酶,FAS、SCD,持续催化形成的。KECC代谢途径分析发16个基因主要参与不饱和脂防酸合成以及糖酵解,肥肝中SCD、ELOV6、 ACSLI表达水平的增加表明肝脏中脂肪的沉积主要是通过不饱和脂肪酸合成的途径,LDHA、 ALDOB、 GNPNAT1主要参与糖代谢过程,在肝脏中表达量的下调说明,填肥使得肝脏中糖代谢能力削弱,进一步造成脂肪在肝脏中的沉积。由此我们认为肥肝形成过程之中脂肪沉积主要是不饱和脂防酸合成增加,糖代谢能力下降造成的。
该研究获得了116个在朗德鹅肥肝形成过程之中差异表达的基因,功能分析表明这些差异表达基因与肝脏脂肪合成、能量转换、细胞生物过程、信号转导等过程有关。这些基因的获得为进一步研究与肥肝形成有关的候选基因提供了重要依据。
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